Come si scelgono i cloni?

2024 Autore: Stanley Ellington | [email protected]. Ultima modifica: 2023-12-16 00:19

quando scegliendo un clone , assicurati che le radici siano forti, bianche e sporgono avidamente dal terreno di coltura. Se le radici sono marroni e avvizzite, o altrimenti sembrano inattive, rimettile a posto e cercane una migliore.

Inoltre, come si clona una singola cella?

1. Contare le cellule per mettere ~ 16.000 cellule nel primo pozzetto (A1) di una piastra a 96 pozzetti contenente 200 µ l di terreno.
2. Rimuovere 100 µ l dalle cellule contenenti A1 e mescolare con B1, pipettando su e giù 3 volte per mescolare bene prima di rimuovere 100 µ l e miscelare con C1, ecc.

Inoltre, come si sceglie una colonia di cellule di mammifero? Posizionare la piastra al microscopio per selezionare sano indifferenziato colonie . Scegli colonie utilizzando una pipetta P-20 impostata su 10 ul. Con attenzione scegliere un colonia senza rompere il colonia in single cellule e trasferirlo in una piastra a 96 pozzetti con tripsina. Pipettare su e giù un paio di volte per disperdere il colonia.

Di conseguenza, come si usa un cilindro clone?

Usando pinze medie sterili, prelevare a cilindro di clonazione . Premere delicatamente il fondo piatto del cilindro nel grasso siliconico liscio e rimuovere con un brusco movimento verticale. Se fatto correttamente, questo darà una distribuzione uniforme del grasso sul fondo del cilindro . Impostare il cilindro sopra una colonia.

Come si scelgono le colonie per le linee cellulari stabili?

Il protocollo per la generazione di linee cellulari stabili richiede diversi passaggi come mostrato di seguito:

1. Generare una curva di uccisione per determinare la concentrazione di antibiotico di selezione ottimale.
2. Cellule trasfettate con i costrutti plasmidici desiderati
3. Selezionare ed espandere colonie policlonali stabili.
4. Identificare i singoli cloni mediante diluizione ed espansione limitate.