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Video: Perché è necessario purificare i prodotti della PCR prima del sequenziamento?
2024 Autore: Stanley Ellington | [email protected]. Ultima modifica: 2023-12-16 00:19
Verifica del desiderato Prodotto è essenziale , che include la conferma della mancanza di aspecificità prodotti e dimeri di primer. Pulire -up della miscela di reazione è anche necessario per rimuovere primer e dNTP non incorporati che possono interferire con le reazioni successive e portare a una sequenza illeggibile.
Inoltre, perché è necessario purificare i prodotti della PCR?
Devi purificare i prodotti PCR eliminare primer, nucleotidi ed enzimi inutilizzati al fine di ottimizzare il successo della legatura, che manterrà e sequencerà il Prodotto di PCR . Per purificare il Prodotti per PCR , viene utilizzata la cromatografia ad esclusione dimensionale.
Ci si potrebbe anche chiedere, si dovrebbero purificare i prodotti della PCR prima della digestione con endonucleasi di restrizione? La maggioranza di restrizione gli enzimi sono attivi in PCR buffer. Per le applicazioni di clonazione, purificazione di Prodotti PCR prima della digestione è necessario per rimuovere la DNA polimerasi termofila attiva presente nel PCR miscela. Le DNA polimerasi possono alterare le estremità del DNA scisso e ridurre la resa della legatura.
Le persone chiedono anche, come si preparano i prodotti PCR per il sequenziamento?
Sequenziamento diretto di prodotti PCR
- Assicurati di aver amplificato il frammento giusto.
- È necessario rimuovere tutti i primer PCR residui e i nucleotidi non incorporati.
- Se i primer della PCR saranno anche i primer di sequenziamento, assicurati che corrispondano alle nostre condizioni.
- Non concentrare eccessivamente il campione!
Puoi sequenziare il prodotto PCR?
Diretto Sequenziamento di Prodotti PCR . Sequenziamento usa solo uno primer invece dei due usati in PCR . Se fate non rimuovere entrambi i primer, desideri prendi due sequenze sovrapposti tra loro non leggibili. Va bene usare a PCR primer per sequenziamento purché corrisponda alle nostre condizioni.
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